重组结核分枝杆菌特异性分泌抗原融合蛋白的活性鉴定及初步应用

摘要：

目的:融合表达结核分枝杆菌分泌蛋白CFP10-ESAT-6或ESAT-6-CFP10,研究其免疫学特性,为结核病的血清学诊断提供物质基础.方法:将一个柔性的氨基酸"接头"插入原核表达载体pET32c(+)中,构建pET32c(+)-linker.PCR法扩增CFP10、ESAT-6基因.将CFP10克隆入改建的载体pET32c(+)的linker前,ESAT-6克隆入linker 后,构建CFP10-ESAT-6融合基因;或将ESAT-6克隆入改建的载体pET32c(+)的linker前,CFP10克隆人linker后,构建ESAT-6-CFP10融合基因,分别转化大肠杆菌XL1-blue,抽提质粒,酶切鉴定;在大肠杆菌BL21中表达,通过Western blot分析其抗原性.结果:两个目的基因分别被按顺序成功克隆入载体pET32c(+)的linker前或后.重组质粒pET32c(+)-CFP10-ESAT-6或pET32c(+)-ESAT-6-CFP10靶基因的测序结果与预计序列完全一致.融合蛋白在BL21菌中高效表达.Western blot分析表明,融合蛋白与活动性肺结核患者血清能发生特异性免疫反应.结论:成功地构建了多抗原基因DNA质粒;pET32c(+)-CFP10-ESAT-6或pET32c(+)-ESAT-6-CFP10质粒在BL21菌中能高效表达rCFP10-ESAT-6或rESAT-6-CFP10融合蛋白,该蛋白兼具CFP10和ESAT-6两种蛋白的抗原性.本研究为rCFP10-ESAT-6或r ESAT-6-CFP10融合蛋白在结核病血清学诊断中应用奠定了基础.

关键词：分枝杆菌、结核、重组、融合蛋白、血清学

所属期刊栏目：16

分类号：R378.91+1(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：江苏省预防医学科研项目Y200424;江苏省徐州市科技计划x2004541

在线出版日期：2006-03-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：135-139