白介素-18基因修饰人脑胶质瘤U87/hIL-18细胞的建立

摘要：

目的 构建人白介素18(hIL-18)基困真核表达载体质粒,建立hIL-18基因修饰并呈稳定表达的人脑胶质瘤U87/hIL-18细胞.方法 从人淋巴细胞cDNA文库钓取hIL-18基因后行PCR扩增,利用peDNA3.1(+)质粒为载体,构建hIL-18真核表达质粒pcDNA 3.1/hIL-18.将构建的重组质粒转染人胶质瘤细胞U87,采用G418筛选单克隆细胞株,ELISA检测培养上清中的hIL-18蛋白含量,提取细胞RNA,RT-PCR方法检测hIL-18基因在U87/hIL-18细胞中的表达.结果 所得hIL-18 cDNA序列与Gene Bank比对一致,构建的质粒经PCR、酶切及测序鉴定正确.质粒转染U87细胞后.经加压筛选获得hIL-18基因稳定、高效表达的U87/hIL-18单克隆细胞株,细胞堵养72 h的上清中,hIL-18蛋白含量达131.2 pg/ml,且RT-PCR结果显示细胞中hIL-18基因表达呈阳性.结论 成功构建hIL-18真核表达质粒pcDNA3.I/hIL-18,并建立U87/hIL-18单克隆细胞株,为IL-18基因修饰的胶质瘤疫苗研究打下了基础.

关键词：神经胶质瘤、白细胞介素18、质粒、U87细胞

所属期刊栏目：14

分类号：R730.264(肿瘤学)

资助基金：广东省自然科学基金001122;中国博士后科学基金面上资助项目20070420766

在线出版日期：2009-04-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：29-32