慢病毒在大鼠胶质瘤细胞基因转导中的应用

摘要：

目的 应用慢病毒介导单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)基因转导大鼠9L胶质瘤细胞.方法 构建慢病毒表达质粒pLenti6/V5-TK并以PCR、酶切及测序等方法鉴定.利用ViraPowerTM慢病毒表达系统,将重组质粒与包装混合物(Packaging Mix)共同转染293T细胞生产假病毒颗粒,转染48 h后收集培养上清,用其感染大鼠9L胶质瘤细胞,以抗稻瘟菌素(BSD)筛选出9L-TK细胞.RT-PCR、Western blot方法检测TK基因在9L-TK细胞中的表达.用MTT方法测试更昔洛韦(GCV)对体外培养的9L-TK细胞杀伤效果.结果 构建的重组质粒pLenti6/V5-TK经PCR、酶切及测序鉴定正确;该质粒与包装质粒共转染293T细胞获取的慢病毒滴度达2.7×105转导单位(TU)/ml.经BDS筛选获得的9L-TK细胞RT-PCR及Western blot结果显示TK基因表达阳性,且GCV对该细胞作用敏感.结论 成功利用慢病毒实现了TK基因转导大鼠9L胶质瘤细胞.

关键词：慢病毒载体、质粒、单纯疱疹病毒胸苷激酶基因、大鼠、神经胶质瘤、9L细胞

所属期刊栏目：12

分类号：Q782(基因工程（遗传工程）)

资助基金：广东省自然科学基金001122;军队医学科研项目01MA038

在线出版日期：2007-09-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：358-362