分泌型核心蛋白聚糖真核表达载体的构建及在HepG2细胞中的表达

摘要：

目的 构建分泌型核心蛋白聚糖(decorin)真核表达载体,并在肝癌细胞HepG2中表达,为研究核心蛋白聚糖的抗肿瘤作用奠定基础.方法 利用特异性引物,应用PCR技术扩增核心蛋白聚糖全长基因cDNA片段,与pcDNA3.1载体进行连接,并转化到大肠杆菌JM109中扩增以获得重组载体,应用双酶切、PCR以及测序鉴定此重组载体;脂质体介导重组载体转染HepG2,经G418筛选建立稳定转染细胞株,分别采用RT-PCR、免疫组化法和westernblot检测其表达.结果 获得了约1080 bp大小的特异性DNA片段;PCR产物与真核表达载体进行连接,经过双酶切、PCR以及测序鉴定证实分泌型核心蛋白聚糖cDNA片段正确插入真核表达载体pcDNA3.1中.RT-PCR方法 可见转染组mRNA表达明显增多,免疫组化和westernblot方法 可见转染组细胞decorin蛋白表达明显增高.结论 成功构建了真核表达载体pcDNA3.1-decorin,建立了稳定转染decorin的HepG2细胞株.

关键词：核心蛋白聚糖、聚合酶链反应、HepG2

所属期刊栏目：13

分类号：Q513+.2;Q539;R735.7(蛋白质)

在线出版日期：2009-01-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：180-184