UDP-葡萄糖醛酸转移酶1A9活性种间差异的超高压液相-质谱法测定
目的:建立快速、灵敏和选择性的测定葡萄糖醛酸转移酶(UGT)1A9活性的超高效液相色谱电喷雾质谱联用(UPLC-ESI-MS)分析方法,研究不同种属UGT1A9活性差异.方法:选用Acquity UPLC BEH C18柱(50 mm×2.1 mm,1.7 μm),以乙腈(B)-0.5%醋酸(A)系统为流动相,流速0.3mL·min-1梯度洗脱,采用UPLC-MS-ESI选择离子监测法测定人及动物肝微粒体孵育体系中UGT1A9探针底物异丙酚及其Ⅱ相代谢产物异丙酚葡萄糖醛酸苷(propofol glucuronide,PG)和内标(对乙酰氨基酚)的浓度,测定UGT1A9的活性.内标,异丙酚及PG的选择离子分别是:m/z 152.2,[M+H]、m/z 177.3和m/z 377.3,[M+Na]+.结果:肝微粒体孵育体系中PG浓度在0.2-12.8μ·mL-1范围内呈良好线性,日内和日间精密度(RSD)小于3%,准确度(RME)在-3.46%～3.03%之间,回收率为96.5%-98.6%.UGT1A9活性的种属差异研究结果表明,异丙酚在人、小鼠、家兔和羊肝微粒体孵育体系中的葡萄苷酸化反应动力学表现为底物抑制方程,而在大鼠肝微粒体孵育体系中的酶催化动力学符合米曼氏动力学方程.异丙酚在不同种属肝微粒体中的O-葡萄苷酸化的内在清除率(CLint)大小为小鼠>大鼠(CLint1,+CLint2)>羊>家免>人>大鼠.结论:UPLC-MS-ESI法快速、灵敏、选择性好,UGT1A9活性和种属差异研究表明,大鼠肝微粒体中异丙酚葡萄糖醛酸化反应的动力学模式与人不同,而小鼠、兔,羊肝微粒体中异丙酚葡萄糖醛酸化反应的内在清除率均远高于人.
超高效液相-质谱、葡萄糖醛酸转移酶1A9、异丙酚、异丙酚葡萄糖醛酸苷、种属差异、人肝微粒体
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R917(药物基础科学)
国家自然科学基金;国家自然科学基金;科技部科研项目
2010-05-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共6页
34-39
