沉默信息调节因子1调控Zeste同源物2增强子对高糖诱导的大鼠肾小管上皮细胞-间充质转化影响的研究

摘要：

目的 探讨沉默信息调节因子 1(SIRT1)通过调控Zeste同源物 2 增强子(EZH2)表达影响肾小管上皮细胞-间充质转化(EMT)过程及DKD肾纤维化发病机制.方法 12 只清洁级雄性SD 大鼠,随机分为正常对照(NC)组、DKD 组,各 6 只,检测各组 BG、BUN 和 24h 尿白蛋白(24 hUAlb).培养大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E),分为正常对照组(Con)、高糖组(HG)和高渗组(HM).在无血清条件下用脂质体 2000(Lip2000)转染法,将空载质粒(Vector)、敲低及过表达SIRT1和EZH2 质粒分别转染细胞,将细胞分为正常空载组(Con+Vector)、正常敲低EZH2 转染组(Con+sh-EZH2)、正常敲低SIRT1 转染组(Con+sh-SIRT1)、正常过表达EZH2 转染组(Con+oe-EZH2)、正常过表达SIRT1 转染组(Con+oe-SIRT1)、高糖空载组(HG+Vector)、高糖敲低EZH2 转染组(HG+sh-EZH2)、高糖敲低SIRT1 转染组(HG+sh-SIRT1)、高糖过表达EZH2 转染组(HG+oe-EZH2)、高糖过表达SIRT1 转染组(HG+oe-SIRT1)、高糖双转过表达组(HG+oe-EZH2+oe-SIRT1).HE、Masson染色观察肾组织病理形态改变,免疫荧光化学染色观察 NRK-52E 细胞中 SIRT1 和 EZH2 表达,Western blot和qRT-PCR检测肾组织和NRK-52E细胞SIRT1、EZH2、E-cadherin、α-SMA和Collegen Ⅲ蛋白和mRNA表达.结果 DKD组BG、BUN、24 hUAlb高于NC组(P＜0.05),HE、Masson染色观察到 DKD 组肾小管管腔扩张,肾小球和肾间质有蓝紫色胶原纤维沉积;DKD 组较 NC 组α-SMA、Collagen Ⅲ、EZH2 蛋白表达升高(P＜0.05),E-cadherin、SIRT1 蛋白表达降低(P＜0.05).培养的细胞中,HG组较Con组α-SMA、Collagen Ⅲ、EZH2 蛋白表达升高(P＜0.05),E-cadherin、SIRT1蛋白表达降低(P＜0.05).与 HG+Vector 组比较,HG+sh-EZH2 组 E-cadherin 蛋白表达升高(P＜0.05),EZH2、α-SMA、Collagen Ⅲ 蛋白表达降低(P＜0.05),HG+oe-EZH2 组 EZH2、α-SMA、Collagen Ⅲ 蛋白表达升高(P＜0.05),E-cadherin 蛋白表达降低(P＜0.05);HG+sh-SIRT1 组较HG+Vector组EZH2、α-SMA、Collagen Ⅲ蛋白表达升高(P＜0.05),SIRT1、E-cadherin蛋白表达降低(P＜0.05),HG+oe-SIRT1 组SIRT1、E-cadherin蛋白表达升高(P＜0.05),EZH2、α-SMA、Collagen Ⅲ蛋白表达降低(P＜0.05);HG+oe-EZH2+oe-SIRT1 组较 HG+oe-EZH2 组 α-SMA、Collagen Ⅲ、EZH2 蛋白表达升高(P＜0.05).无论是敲减内源性SIRT1 或过表达SIRT1,对EZH2 mRNA表达均无影响.免疫共沉淀研究结果显示,在肾小管上皮细胞中SIRT1 蛋白与EZH2 蛋白存在体内互作关系.结论 SIRT1 可负调控EZH2 蛋白表达抑制肾小管上皮细胞EMT过程,抑制DKD肾纤维化以发挥肾脏保护作用.

关键词：大鼠、糖尿病肾脏疾病、上皮细胞-间充质转化、沉默信息调节因子1、Zeste同源物2增强子

所属期刊栏目：31

分类号：R735.2;R587.2;R329.2

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;贵州省科技计划项目;贵州省研究生科研基金立项课题

在线出版日期：2023-07-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：433-442