miR?320b靶基因预测与鉴定

摘要：

目的 寻找miR-320b靶基因,探讨其参与T2DM发生发展的分子机制.方法 4种在线软件Target Scan、MIRDB、DIANA TOOLS和miRmap预测miR-320b靶基因.采用在线软件VENNY2.1选取4种预测结果交集.在线数据库String查询靶基因编码蛋白质间的相关性,筛选其候选靶基因.采取全基因合成方式合成野生型及突变型靶基因双荧光素酶重组Psicheck-2质粒载体,Sanger测序鉴定重组质粒是否构建成功.选取对数生长期293T细胞分为6组:野生型质粒+miRNA阴性对照组(Psicheck2-PTEN-WT+NC)和野生型质粒+miR-320b mimic组(Psicheck2-PTEN-WT+mimic);突变型质粒+miRNA阴性对照组(Psicheck2-PTEN-Mut+NC)和突变型质粒+miR-320b mimic组(Psicheck2-PTEN-Mut+mimic);空质粒载体+miRNA阴性对照组(Psicheck2-NC+NC)和空质粒载体+miR-320b mimic组(Psicheck2-NC+mimic).各组进行相应质粒和miRNAs共转染,检测双荧光素酶活性.结果 4种在线软件Target Scan、MIRDB、DIANA TOOLS和miRmap预测miR-320b靶基因数分别为847、1045、806和6208,VENNY2.1取交集后得到66个共同靶基因.在线数据库String显示,66个靶蛋白之间的相关性主要集中在以人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)为核心的蛋白.双荧光素酶报告基因实验显示,Psicheck2-PTEN-WT+miR320b组荧光素酶活性比值低于Psicheck2-PTEN-WT+NC组(P<0.05).结论 miR-320b作用于靶基因PTEN的3'UTR,为探讨miR-320b参与T2DM发生发展提供依据.

关键词：miR-320b、双荧光素酶报告基因实验、靶基因

所属期刊栏目：31

分类号：R734.2;S831;R393

资助基金：贵州省卫生健康委科学技术基金项目;贵州省卫生健康委科学技术基金项目;黔东南州科技计划项目

在线出版日期：2023-02-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：12-16