10.3969/j.issn.1006-6187.2019.02.013
p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路对高糖环境下HK-2细胞凋亡影响的研究
目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路对高糖环境下HK-2细胞凋亡的影响.方法 用p38 MAPK信号通路抑制剂作用于高糖环境下的HK-2细胞,MTT检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA)法检测细胞活性氧簇(ROS)水平,Western blot检测p38MAPK、磷酸化的p38 MAPK(p-p38 MAPK)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase-3)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(caspase-3)蛋白水平,ELISA检测上清中肿瘤坏死因子 α(TNF-α)水平.结果 高糖作用后的HK-2细胞活力降低[(0.79±0.05)vs(0.32±0.02]),细胞凋亡率[(5.35±0.58)%vs(17.42±1.23)%]、细胞中ROS水平[(4.62±0.05)vs(20.65±0.21)]、细胞培养液上清中TNF-α 水平[(25.64±1.36)vs(50.71±1.28)mg/L]均升高,cleaved caspase-3、caspase-3、p-p38 MAPK蛋白水平升高,与对照组HK-2细胞比较,差异有统计学意义(P<0.05).在细胞培养液中加入p38 MAPK信号通路抑制剂培养后,细胞凋亡率降低[(17.42±1.23)%vs(12.65±1.14)%vs(9.17±0.85)%vs(7.25±0.64)%],细胞活力升高[(0.32±0.02)vs(0.41±0.03)vs(0.52±0.04)vs(0.68±0.05)],细胞中ROS水平[(20.65±0.21)vs(16.21±1.23)vs(12.04±1.36)vs(9.75±0.09)]和细胞培养液上清中TNF-α 水平[(50.71±1.28)vs(43.23±2.24)vs(36.01±2.17)vs(32.84±1.22)mg/L]均降低,细胞中cleaved caspase-3、caspase-3、p-p38 MAPK的蛋白水平降低,且p38 MAPK信号通路抑制剂浓度越高,作用越显著,与单纯高糖培养后的细胞比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 抑制p38 MAPK信号通路可减弱高糖诱导的HK-2细胞凋亡.
p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路、HK-2细胞、高糖、凋亡
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2019-04-02(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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