甘蔗黄叶病毒P0基因的克隆与原核表达及抗血清制备

摘要：

根据已发表ScYLV-P0基因系列设计特异性引物,应用RT-PCR技术从甘蔗病叶的mRNA扩增得到目的DNA片段.以pET32a(+)为原核表达载体,构建重组表达质粒pET32a-P0.经过双酶切鉴定和DNA测序后,将重组表达质粒转入大肠杆菌BL21 (DE3)pLySs,在30℃培养条件下IPTG诱导表达.通过SDS-PAGE电泳检测融合蛋白表达情况.表达结果显示,在该表达系统中,融合表达蛋白P0是以包涵体形式的蛋白存在;P0融合蛋白大小约45kDa,与P0开放阅读框的理论推算值29.991 kDa加上载体自身蛋白约18 kDa相符,用Ni2+-NTA琼脂糖亲和层析纯化融合蛋白,免疫家兔制备出抗血清,通过酶联法(ID-ELISA)测定本实验制备的ScYLY-P0抗血清工作浓度为1:25000.

关键词：甘蔗黄叶病毒、沉默抑制子、原核表达、抗血清

分类号：S85;R39

资助基金：中央级公益性科研院所基本科研业务专项ITBB110303;现代农业产业技术体系建设专项资金nycytx-24

在线出版日期：2014-04-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1-3,9