猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪肺炎支原体双重荧光PCR检测方法的建立

摘要：

为了建立快速检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪肺炎支原体(Mhp)的双重荧光PCR检测方法,本试验根据NCBI数据库中的PRRSV ORF7和MhpP36基因,分别设计引物和TaqMan探针,通过优化扩增反应条件,建立PRRSV和Mhp的双重荧光PCR检测方法;分析所建立PCR方法的特异性、敏感性和重复性,并初步应用于临床样品检测.结果显示,25 μL PCR 反应体系中各引物最佳添加量:PRRSV-F 1.5 μL、PRRSV-R 1.0μL、PRRSV-P 0.8 μL、Mhp-F 1.2 μL、Mhp-R 1.3 μL、Mhp-P0.7μL.优化后的PCR反应程序:50℃反转录20min,95℃预变性2 min,95℃变性5 s,55℃退火10 s,72℃延伸20 s(此处收集荧光),40个循环.建立的双重荧光PCR方法特异性较好,与其他猪常见病原体无交叉反应;检测PRRSV和Mhp的敏感性分别为4.2拷贝/μL和9.6拷贝/μL;批内和批间变异系数均不高于2％,具有很好的重复性.因此,本试验建立的双重荧光PCR方法可同时检测PRRSV和Mhp,为猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)和猪支原体肺炎(MPS)的诊断和防控工作提供支持.

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪肺炎支原体、双重荧光PCR、检测

所属期刊栏目：59

分类号：S852.65+1(动物医学（兽医学）)

资助基金：山东省重大科技创新工程项目;山东省自然科学基金

在线出版日期：2023-07-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：60-64