基于猴痘病毒A27L蛋白的间接ELISA抗体检测方法的建立
猴痘病毒(MPXV)是一种能引起人兽共患病的正痘病毒属(Orthopoxvirus)成员,在人群和野生动物中具有较高的感染率,对人类公共卫生安全造成重大威胁.为了建立快速、准确的MPXV感染抗体ELISA检测方法,对人群和动物中MPXV感染情况进行流行病学监测,本研究构建了 MPXV-A27L蛋白的原核表达系统,以其作为包被抗原建立了 MPXV间接ELISA抗体检测方法,并优化了一系列反应条件,确定了检测结果判定标准,评估了建立方法的特异性、重复性和敏感性.结果显示,成功表达了 MPXV-A27L蛋白,确定了 ELISA最佳反应条件:抗原包被浓度为0.25 μg/mL;1％BSA封闭1 h;待检血清1∶200稀释,37℃孵育30 min;酶标二抗1∶20 000稀释,孵育30 min;底物显色10 min.待检血清样品OD450值＞0.316时判定为阳性,OD450值＜0.262时判定为阴性,OD450值介于0.262～0.316时则判为可疑.该检测方法与山羊痘病毒属的山羊痘病毒(GTPV)、绵羊痘病毒(SPPV)和牛结节性皮肤病病毒(LSDV)阳性血清不发生交叉反应;批内变异系数为2.75％～7.45％,批间变异系数为6.55％～9.59％;该方法可检测到血清最大稀释度为1∶104.结果表明,本研究建立的MPXV间接ELISA抗体检测方法具有良好的特异性、重复性和敏感性,为MPXV的临床检测和流行病学调查提供了依据,对于猴痘疫情的防控具有重要作用.
猴痘病毒、A27L蛋白、间接ELISA
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S855.3(动物医学（兽医学）)
国家重点研发计划;国家自然科学基金
2023-01-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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