山羊隐花色素2基因真核表达载体的构建及生物信息学分析

摘要：

为了构建山羊隐花色素2(CRY2)基因的真核表达载体,分析CRY2蛋白的基本特性,本试验采用逆转录PCR扩增山羊CRY2基因的编码序列(CDS),并以同源重组的方式将其连接至pcDNA3.1-Puro-N-3HA载体,获得pcDNA3.1-3HA-gCRY2重组质粒.酶切和测序鉴定后将重组质粒转染至HEK293T细胞,采用实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹技术检测山羊CRY2基因在mRNA和蛋白水平的表达变化;同时利用生物信息学软件对CRY2蛋白的基本理化性质和功能进行预测和分析.结果显示:pcDNA3.1-3HA-gCRY2重组质粒的酶切和测序结果与预期一致;转染HEK293T细胞后,pcDNA3.1-3HA-gCRY2转染组CRY2 mRNA的相对表达量比pcDNA3.1-Puro-N-3HA转染组高600倍左右(P＜0.001),CRY2蛋白成功表达;山羊、小鼠和人等哺乳动物CRY2基因CDS区具有较高的相似性;CRY2蛋白不存在信号肽和跨膜区,预测显示其可能与ARNTL、CLOCK、PER1和PER2等蛋白互作.结果表明,本试验成功构建了山羊CRY2基因的真核表达载体,并预测分析了山羊CRY2蛋白的基本理化特性,为探究山羊CRY2基因及其编码蛋白的生物学功能提供了科学依据.

关键词：山羊、隐花色素2、昼夜节律、载体构建、生物信息学

所属期刊栏目：58

分类号：S857.2(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金;中国博士后科学基金;陕西省大学生创新创业训练计划项目

在线出版日期：2022-08-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：1-9