几种外来动物病毒多重普通和实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及其初步应用

摘要：

为了能够同时开展对小反刍兽疫病毒(PPRV)、蓝舌病血清8型病毒(BTV8)、鹿流行性出血热血清1型病毒(EHDV1)和非洲马瘟病毒(AHSV)4种外来动物疫病病原体的核酸检测,本试验根据GenBank中相关病毒序列设计引物和探针,建立多重普通逆转录PCR(RT-PCR)和实时荧光定量RT-PCR检测方法,并在采集的临床样本检测中进行初步应用验证.结果显示:建立的PPRV/BTV8/EHDV1三重实时荧光定量RT-PCR检测方法仅对PPRV、BTV8和EHDV1有特异荧光信号,检测敏感度可达101.70～102.08copies/μL DNA;建立的PPRV/BTV8/EHDV1/AHSV四重普通RT-PCR方法可特异性同步检测PPRV、BTV8、EHDV1和AHSV,检测敏感度可达103 copies/μL DNA;2种方法对羊痘、羊口疮、口蹄疫、阿卡斑、牛病毒性腹泻等临床相似的病毒均无扩增.在925份临床样本中检测出1例PPRV核酸阳性样本;经核苷酸序列测定及BLAST比对确定为谱系Ⅳ型PPRV毒株序列.本试验所建立的三重实时荧光定量RT-PCR检测方法和四重普通RT-PCR方法可特异性同步检测相应的3种或4种病毒病原,且具有临床样本检测的应用潜力.

关键词：小反刍兽疫病毒、蓝舌病病毒8型、流行性出血热病毒1型、非洲马瘟病毒、四重普通RT-PCR、三重实时荧光定量RT-PCR

所属期刊栏目：58

分类号：S855.3(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点研发计划;国家重点研发计划;国家自然科学基金

在线出版日期：2022-06-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：27-33,38