多黏菌素抗性基因mcr-4/5/8实时荧光定量PCR检测方法的建立

摘要：

多黏菌素是治疗多重革兰阴性耐药菌最重要的药物之一,近年来,其耐药性逐年持续上升.多黏菌素耐药基因mcr可以通过质粒传播,对人类健康和畜牧业生产造成了严重的威胁.本试验根据GenBank下载的多黏菌素耐药基因mcr-4、mcr-5和mcr-8的基因参考序列,设计特异性引物并验证其特异性,用SYBR Green Ⅰ染料法建立实时荧光定量检测方法.将mcr-4、mcr-5和mcr-8基因克隆到pMD19-T载体上,构建标准质粒,再以标准质粒为模板建立荧光定量PCR反应的扩增曲线、标准曲线和熔解曲线.结果 发现,扩增曲线平行且光滑;标准曲线线性关系良好,扩增效率接近100％,R2 ＞0.99;标准品熔解曲线呈特异性单峰,表明本次试验构建的方法特异性好.本试验中多黏菌素抗性基因mcr-4、mcr-5和mcr-8实时荧光定量检测方法的建立,可以为未知样品中相应基因的检测提供依据.

关键词：荧光定量PCR;多黏菌素;标准曲线;mcr基因

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分类号：S852.61(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点研发计划;国家自然科学基金

在线出版日期：2021-11-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：65-69,中插6-中插7