动物RNA病毒检测关键试剂—反转录酶(M-MLV Rtase)的制备

摘要：

反转录酶是动物RNA病毒分子诊断用到的关键试剂之一.为获得纯度高、活性高、制备简单经济的M-MLVRTase,本试验将M-MLV RTase的基因序列进行密码子优化,合成并构建表达载体.将表达载体转化到大肠杆菌E.coli Rosetta宿主菌种,经IPTG诱导后实现M-MLV RTase的可溶性表达.利用Ni2+柱亲和层析纯化载有6xHis标记的重组M-MLV RTase,对重组酶进行Western Blotting试验,鉴定为M-MLV RTase.通过对动物流感病毒RNA的普通RT-PCR和荧光RT-PCR检测来评价重组酶的活性并估测其活性单位.将活性单位相当的重组酶和商品酶进行比较,结果显示,制备的重组酶活性高,对不同浓度病毒RNA的检测结果与商品酶相当.研制的M-MLV RTase可以用于动物RNA病毒的分子诊断.

关键词：M-MLV RTase、表达、纯化、RT-PCR

所属期刊栏目：52

分类号：S852.65+93(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家质检总局科技计划项目2014IK232

在线出版日期：2017-02-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：26-28,后插2