兔多杀性巴氏杆菌外膜蛋白OMPH1基因的克隆及原核表达

摘要：

本试验旨在克隆和表达兔多杀性巴氏杆菌外膜蛋白OMPH1基因,并对其表达产物的反应原性进行研究.以兔多杀性巴氏杆菌C51-2-499株总DNA为模板,进行外膜蛋白基因OMPH1的PCR扩增,得到了1条大小为1 041 bp的基因片段,克隆至pMD-18T中.测序分析证明,它与国内外报道的多杀性巴氏杆菌OMPH1基因的核苷酸序列相似性达99％以上.将该基因克隆到原核表达载体pET-30a(+)中,经酶切和测序分析表明,重组表达载体pET-30a(+)-OMPH1构建成功.将此重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG进行诱导.SDS-PAGE检测结果证实,该基因在大肠杆菌中以融合蛋白的形式得到表达,表达产物的分子质量约47KD,与预期的结果一致.Western-blot分析表明,OMPH1重组表达蛋白具有反应原性,可被兔多杀性巴士杆菌阳性血清识别,为兔多杀性巴氏杆菌基因重组疫苗及新型诊断试剂的研究奠定了基础.

关键词：兔多杀性巴氏杆菌、OMPH1基因、克隆、原核表达

所属期刊栏目：50

分类号：S852.61+2(动物医学（兽医学）)

资助基金：吉林省科技厅青年基金项目201201099;吉林省教育厅项目吉教科合字[2012]第55号;吉林省科技发展计划项目20100230,20111820,20120229;吉林农业大学青年启动基金201241;国家现代农业产业技术体系建设专项CARS-44-E-6;国家自然科学基金项目31272611

在线出版日期：2014-09-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：15-17,21