流感病毒H1/H3亚型通用双重短探针实时RT-PCR检测技术与标准质控品研究

摘要：

采用TaqMan方法,在对人、禽、猪以及马流感病毒代表株HA序列多重比对基础上,设计合成动物流感病毒H1亚型和H3亚型的兼并引物和LNA和MGB修饰短探针,经反应条件优化,建立了针对流感病毒H1亚型及H3亚型的双重实时RT-PCR检测方法.应用建立的方法分别对人、禽、猪以及马流感病毒核酸进行检测,结果显示,建立的方法通用性良好,可有效检测和鉴别H1和H3亚型流感病毒,但对其他亚型的流感病毒以及新城疫病毒核酸检测结果为阴性,表明建立的方法特异性强.进一步经体外转录制备了猪流感病毒H1和H3亚型HA完成编码区的核酸标准品cRNA,经稀释、分装、定量、均匀性和稳定性检验后,作为方法的质控品对建立的方法进行评价,结果表明,所建立的双重短探针实时RT-PCR方法灵敏度可达2.0×102拷贝/反应.在对586份临床样品的检测中,进一步证实了该方法快速、灵敏且重复性好,可满足动物流感病毒H1/H3亚型的早期快速检测的需求.

关键词：动物流感病毒、H1/H3亚型、通用双重、短探针、实时RT-PCR

所属期刊栏目：48

分类号：S852.65+9.5(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家科技基础性工作专项项目2008FY130100;动物流感检测技术国家标准专项;质检公益性行业科研专项;动物A型流感标准物质研制与快速分型检测201010067

在线出版日期：2013-01-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：3-6