猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒2型基因重组质粒实时荧光定量PCR标准曲线的构建

摘要：

根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF7和猪圆环病毒2型(PCV2)ORF1的核苷酸序列设计特异性引物,经RT-PCR/PCR扩增,分别扩增出大小为308 bp和417 bp的部分基因片段.用T4连接酶将目的片段与pGEM-Teasy载体系统连接,并转化到大肠杆菌DH-5α株感受态细胞.提取的质粒经PCR、酶切和测序鉴定,证实为PRRSV和PCV2的阳性重组质粒.将重组标准质粒10倍系列稀释后作为模板,通过实时荧光定量PCR方法(Real-time PCR),建立了PRRSV、PCV2的标准曲线及其直线回归方程,并确定其最佳读板温度.该方法具有线性关系好、特异性强、敏感性高、重复性好等特点,为分析PRRSV和PCV2共感染猪体内病毒的绝对含量提供了必要的技术平台.

关键词：PRRSV、PCV2、实时荧光定量PCR、重组质粒、标准曲线

所属期刊栏目：43

分类号：S858.285.3(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金30371072

在线出版日期：2007-06-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：10-12