外泌体介导miRNA-155靶向CTHRC1对胃癌细胞腹膜种植转移的影响

摘要：

目的 探讨外泌体转运miRNA-155靶向胶原三螺旋重复蛋白1(CTHRC1)对胃癌细胞腹膜种植转移的影响.方法 提取胃癌BCG-823细胞外泌体并采用透射电子显微镜鉴定;实时荧光定量PCR检测胃癌BCG-823细胞和外泌体miRNA-155水平;激光共聚焦显微镜观察人腹膜间皮HMrSV5细胞对外泌体吞噬情况;设立阴性对照组、外泌体组和miRNA-155 mimic组,通过划痕实验检测外泌体转运miRNA-155对腹膜间皮细胞HMrSV5迁移力的影响;利用生物信息预测软件结合荧光素酶报告基因检测验证miRNA-155的靶基因;Western blotting检测细胞CTHRC1蛋白表达.结果 提取的外泌体呈现杯口状,直径40-150nm,外泌体标志性蛋白CD9、CD81呈阳性,而内质网分子伴侣Calnexin不表达;外泌体miRNA-155表达水平显著高于胃癌BCG-823细胞(P<0.05);采用PKH26对外泌体标记后在显微镜下呈红色,其主要分布在人腹膜间皮细胞HMrSV5的细胞质内,且视野下大部分细胞均可见红色荧光.利用生物分析软件(TargetScan,CLIP-Seq,miRDB and miRanda)预测了miRNA-155的下游靶基因为CTHRC1.与阴性对照组比较,外泌体组和miRNA-155 mimic组腹膜间皮细胞迁移力、细胞增殖、细胞活力和细胞迁移显著增加,且miRNA-155 mimic组高于外泌体组,其中外泌体中miRNA-155表达水平为0.49±0.03,CTHRC1蛋白表达水平显著降低,且miRNA-155 mimic组低于外泌体组(P<0.05).结论 胃癌细胞来源的外泌体可促进腹膜间皮细胞迁移,因此增加肿瘤转移风险,其机制可能是外泌体内过表达的miRNA-155靶向抑制CTHRC1蛋白表达水平所引起.

关键词：外泌体、胃癌、miRNA-155、胶原三螺旋重复蛋白1、腹膜种植

所属期刊栏目：26

分类号：R735.2(肿瘤学)

资助基金：北京市希思科恒瑞肿瘤研究基金项目Y-HR2017-054

在线出版日期：2022-11-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1521-1527