沙眼衣原体Lp xA蛋白的表达、纯化及多克隆抗体的制备

摘要：

目的 纯化沙眼衣原体LpxA蛋白并制备抗LpxA蛋白的多克隆抗体,为研究LpxA蛋白的功能奠定基础.方法 PCR扩增LpxA基因,以pET28a质粒为载体,构建表达质粒pET28a-LpxA,转化大肠埃希菌BL21,利用IPTG诱导含有6*His的融合蛋白表达,并使用Ni2+亲和层析柱进行纯化.以纯化的His-LpxA蛋白作为免疫原,经背部皮下免疫新西兰兔,制备多克隆抗体,并使用免疫印迹法检测抗体与His-LpxA蛋白的反应以及使用ELISA法测定多克隆抗体的滴度.结果 重组表达质粒pET28a-LpxA构建成功,融合His-LpxA蛋白的相对分子质量为32.8 kDa,能够在大肠杆菌中高效表达,纯化后目的蛋白纯度约为95％,免疫新西兰兔后,抗血清能够识别重组的His-LpxA蛋白,其滴度大于1:10240.结论 成功纯化了LpxA蛋白和制备了抗血清,为研究LpxA蛋白的功能提供实验基础.

关键词：沙眼衣原体、LpxA蛋白、多克隆抗体

所属期刊栏目：22

分类号：R772(眼科学)

在线出版日期：2018-09-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1436-1439