hβ-NGF基因真核表达载体构建及亚细胞定位

摘要：

目的 构建含EGFP标签的人β-神经生长因子(hβ-NGF)的真核表达载体,观察和分析其在HEK293细胞中的定位,为后续基因转移实验奠定基础.方法 PCR扩增hβ-NGF 基因编码框,连接到pEGFP-N1载体,将HEK293细胞分为对照组(不转染)、空载组(转染pEGFP-N1质粒)和实验组(转染pEGFP-N1-hβ-NGF质粒),后两组采用脂质体法转染,24h后荧 光显微镜下观察EGFP瞬时表达及细胞定位,通过蛋白序列数据库和生物信息学软件进一步分析亚细胞定位.结果 经双酶切和测序鉴定,pEGFP-N1-hβ-NGF真核表达载体构建成功.与空载 组比较,实验组融合EGFP只少量分布于胞质中(P＜0.05),不存在于细胞核内.生物信息学分析表明,hβ-NGF基因编码长241个氨基酸的肽链,由信号肽、前导肽和功能肽3段构成,含有 2个N-糖基化位点,6个高度保守半胱氨酸残基,可以形成3个二硫键,是可溶、不稳定的分泌型蛋白;亚细胞定位该蛋白主要位于细胞外,部分分布于胞吞内体和高尔基体,以模序二聚体形 式发挥生物学功能.结论 成功构建了有活性的hβ-NGF真核表达载体,观察到融合蛋白在HEK293真核细胞系分泌表达,其亚细胞分布与生物信息学分析一致.

关键词：hβ-NGF、真核表达、亚细胞定位、生物信息学分析

所属期刊栏目：22

分类号：Q813.6(生物工程学(生物技术))

资助基金：黑龙江省自然科学基金资助项目D201258;黑龙省卫生计生委科研课题2016-286

在线出版日期：2018-08-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：300-302