scFv-RBP4融合蛋白的构建
目的 构建scFv-RBP4融合蛋白.方法 采用德泰生物最新开发的密码子优化软件MaxCodonTM Optimization Program (V13)对提供的scFv-RBP4蛋白氨基酸序列进行优化,设计全长拼接引物,通过双酶切法将scFvRBP4基因插入到表达载体proEM中,并通过酶切法和测序确认最终表达载体的准确性,最终转到DH5a克隆菌株中,通过质粒大抽试剂盒提取转染级质粒,之后将质粒通过转染试剂转染到哺乳动物细胞HEK293T中进行瞬时表达,再通过Ni-IDA亲和层析纯化scFv-RBP4蛋白.结果 酶切和测序结果显示,scFv-RBP4蛋白构建正确,目标蛋白纯度＞90％.结论 构建的scFv-RBP4融合蛋白可以在HEK293T细胞内获得稳定表达,为后期融合蛋白的提取及功能研究打下基础.
RBP4、融合蛋白、scFv、HEK293T、构建
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R714.2(妇产科学)
国家自然科学基金面上项目81571455
2017-08-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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1082-1085
