10.3969/j.issn.1007-4287.2017.01.055
绿色荧光蛋白标记SOX9基因慢病毒载体的构建及在兔骨髓间充质干细胞中的表达
目的:构建绿色荧光蛋白标记的 SOX9基因慢病毒载体,转染兔骨髓间充质干细胞,观察 SOX9基因的表达情况。方法双酶切从 GeneArt提供的含 SOX9基因序列的质粒13ABIV6C_1366933并克隆到 pLenti6.3_MCS_IRES2-EGFP载体,获得含 SOX9基因的质粒 pLMIG-13GS0345-1,通过293T细胞包装后获得绿色荧光蛋白标记的SOX9基因慢病毒载体(Lenti-SOX9-GFP),将Lenti-SOX9-GFP转染兔骨髓间充质干细胞后观察SOX9基因的表达情况。结果测序结果显示质粒 pLMIG-13GS0345-1中的插入序列与基因库中 SOX9(NM_000346)基因序列完全一致,成功构建 Lenti-SOX9-GFP慢病毒载体。Lenti-SOX9-GFP转染兔骨髓间充质干细胞后可观察到绿色荧光蛋白的表达,RT-PCR与 Western Blot检测结果证明 Lenti-SOX9-GFP转染目的细胞后可在 mRNA及蛋白水平成功表达SOX9。结论本实验成功构建了绿色荧光蛋白标记的携带 SOX9基因的 Lenti-SOX9-GFP慢病毒载体,并在兔骨髓间充质干细胞中成功表达,为下一步研究提供前期实验基础。
慢病毒载体、骨髓间充质干细胞、椎间盘、SOX9 基因、绿色荧光蛋白
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Q813(生物工程学(生物技术))
南京军区重点课题12Z06
2017-03-07(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
共6页
140-145