腺病毒载体介导人 BMP-2与 VEGF-165对骨髓间充质干细胞形态特征及增殖能力影响的实验研究
目的:探讨携带骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP-2)与血管内皮生长因子165(vascu-lar endothelial growth factor 165,VEGF-165)双基因的腺病毒载体转染骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)后对细胞形态特征及增殖能力的影响。方法选取4只新西兰大白兔抽取骨髓液,分离鉴定获得第3代 BMSCs 做为实验对象,实验分成4组:Ad-BMP-2-VEGF-165转染组(A 组);Ad-BMP-2转染组(B 组);Ad-VEGF-165转染组(C 组);BMSCs 对照组(D 组),每组6个复孔,连测3次。首先,将腺病毒载体转染 BMSCs,获得最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI);其次,转染后1-3 d 观察转染各组细胞与 D 组形态和贴壁状况差异变化;再次,ELISA 法检测转染各组目的蛋白表达量与 D 组的差异;最后,MTT 法测定1-7 d 各组细胞增殖曲线,并进行组间比较。结果BMSCs 分离鉴定成功,第3代细胞高表达 CD29(99.82%),CD44(94.14%)抗原。腺病毒转染组最佳 MOI 值分别为 A 组 MOI=80,B 组 MOI=80,C 组 MOI=100。腺病毒转染后各组细胞形态和贴壁特性未见明显改变,边界清晰,细胞呈梭形,细胞核较大呈圆形或椭圆形,生长旺盛。转染组细胞高表达目的蛋白,在第5d 目的蛋白浓度到高峰,A 组 BMP-2浓度为1525.47±58.16 pg/ml,B 组为1506.48±92.65 pg/ml;A 组 VEGF-165浓度为1732.14±126.25 pg/ml,C 组为1733.59±127.07 pg/ml,转染组在不同时间点的目的蛋白表达量与 D 组差异均具有统计学意义(P <0.05)。MTT 法显示第1 d、第2 d BMSCs 未见明显增长,第3 d 开始呈指数增长,第5 d 达高峰;第3 d,A 组、B 组吸光度(optical density,OD)值分别为0.113±0.004、0.112±0.003,均高于 C 组、D 组(P <0.05);第4 d, A、B、C 各组 OD 值分别为0.113±0.004、0.110±0.003、0.105±0.001,均高于 D 组0.102±0.004,且差异有统计学意义(P <0.05)。结论BMP-2与 VEGF-165对 BMSCs 形态和贴壁性无明显影响,但是均可以促进 BMSCs 增殖,且两者对细胞的增殖无明显叠加作用。
骨形态发生蛋白 2、血管内皮生长因子 165、腺病毒载体、细胞增殖
R318.5(医用一般科学)
山东省自然科学基金资助项目ZR2010HM090
2015-12-14(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
共5页
1813-1817