腺病毒载体介导人 BMP-2与 VEGF-165对骨髓间充质干细胞形态特征及增殖能力影响的实验研究
目的：探讨携带骨形态发生蛋白2（bone morphogenetic protein 2，BMP-2）与血管内皮生长因子165（vascu-lar endothelial growth factor 165，VEGF-165）双基因的腺病毒载体转染骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs）后对细胞形态特征及增殖能力的影响。方法选取4只新西兰大白兔抽取骨髓液，分离鉴定获得第3代 BMSCs 做为实验对象，实验分成4组：Ad-BMP-2-VEGF-165转染组（A 组）；Ad-BMP-2转染组（B 组）；Ad-VEGF-165转染组（C 组）；BMSCs 对照组（D 组），每组6个复孔，连测3次。首先，将腺病毒载体转染 BMSCs，获得最佳感染复数（multiplicity of infection，MOI）；其次，转染后1-3 d 观察转染各组细胞与 D 组形态和贴壁状况差异变化；再次，ELISA 法检测转染各组目的蛋白表达量与 D 组的差异；最后，MTT 法测定1-7 d 各组细胞增殖曲线，并进行组间比较。结果BMSCs 分离鉴定成功，第3代细胞高表达 CD29（99．82％），CD44（94．14％）抗原。腺病毒转染组最佳 MOI 值分别为 A 组 MOI＝80，B 组 MOI＝80，C 组 MOI＝100。腺病毒转染后各组细胞形态和贴壁特性未见明显改变，边界清晰，细胞呈梭形，细胞核较大呈圆形或椭圆形，生长旺盛。转染组细胞高表达目的蛋白，在第5d 目的蛋白浓度到高峰，A 组 BMP-2浓度为1525．47±58．16 pg／ml，B 组为1506．48±92．65 pg／ml；A 组 VEGF-165浓度为1732．14±126．25 pg／ml，C 组为1733．59±127．07 pg／ml，转染组在不同时间点的目的蛋白表达量与 D 组差异均具有统计学意义（P ＜0．05）。MTT 法显示第1 d、第2 d BMSCs 未见明显增长，第3 d 开始呈指数增长，第5 d 达高峰；第3 d，A 组、B 组吸光度（optical density，OD）值分别为0．113±0．004、0．112±0．003，均高于 C 组、D 组（P ＜0．05）；第4 d， A、B、C 各组 OD 值分别为0．113±0．004、0．110±0．003、0．105±0．001，均高于 D 组0．102±0．004，且差异有统计学意义（P ＜0．05）。结论BMP-2与 VEGF-165对 BMSCs 形态和贴壁性无明显影响，但是均可以促进 BMSCs 增殖，且两者对细胞的增殖无明显叠加作用。
骨形态发生蛋白 2、血管内皮生长因子 165、腺病毒载体、细胞增殖
R318.5(医用一般科学)
山东省自然科学基金资助项目ZR2010HM090
2015-12-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共5页
1813-1817
