10.3969/j.issn.1007-4287.2012.12.002
hAP-2α转录因子酵母双杂交诱饵载体的构建及自激活检测
目的 构建hAP-2α转录因子酵母双杂交诱饵载体,检测hAP-2α转录因子在酵母双杂交中的表达及对报告基因有无激活作用,为进一步研究乳腺癌中hAP-2α转录因子相互作用蛋白的作用机制奠定基础.方法 通过RT-PCR方法从Hela细胞克隆hAP-2α基因,SalI和EcoRI双酶切后连接诱饵载体pGBKT7,获得诱饵质粒pGBKT7-hAP2α,经测序鉴定后与酵母双杂交空质粒pGBKT7转化到酵母菌株AH109,在营养缺陷培养基中观察pGBKT7-hAP2α的自激活作用,同时利用蛋白印迹法分析诱饵蛋白的表达.结果 成功扩增人乳腺癌hAP-2α基因,并准确克隆入pGBKT7中,诱饵载体pGBKT7-hAP2α成功转化到酵母菌株AH109中,经表型筛选检测无自激活作用,蛋白印迹法检测证实pGBKT7-hAP2α在酵母细胞中表达诱饵蛋白hAP2α.结论 成功构建酵母双杂交诱饵质粒pGBKT7-hAP2α,诱饵质粒pGBKT7-hAP2α无自激活活性,可用于研究乳腺癌或其他疾病中与hAP-2α蛋白的相互作用分子.
hAP-2α、诱饵载体、酵母双杂交、自激活作用
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R737.9(肿瘤学)
湖北省青年基金资助项目QJX2010-31
2013-04-01(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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