HRE对A549细胞中Egr-1启动子辐射诱导表达的影响

摘要：

目的 构建乏氧/辐射双敏感启动子介导的增强型绿色荧光蛋白表达载体,探讨HRE对A549细胞中Egr-1启动子在乏氧和常氧条件下辐射诱导表达的影响.方法 利用化学合成HRE上、下链,PCR扩增得到双链HRE;利用基因重组技术构建HRE/Egr-1双敏感启动子介导增强型绿色荧光蛋白的表达载体pcDNA3.1-HRE/Egr-1-EGFP,经酶切、PCR和测序鉴定正确后,质粒经脂质体介导转染肺腺癌A549细胞,不同剂量照射和不同浓度乏氧后,流式细胞术检测EGFP的表达,以此反映Egr-1的表达特性.结果 酶切、PCR和测序鉴定pcDNA3.1-HRE/Egr-1-EGFP质粒构建正确.流式细胞术结果显示常氧条件下,不同剂量X射线照射后,A549细胞中EGFP表达在随着时间延长而逐渐增加,2 Gy和4 Gy照射后12 h时达到最大,而6 Gy、8 Gy和10 Gy照射后在8 h时达到最大,而后逐渐降低,与0 h表达比较具有显著性差异(P<0.05,P<0.01).0.1%-2.5%的氧浓度条件下,EGFP表达随着氧浓度和剂量的增加而逐渐增加,在1%氧浓度时表达量最大,与常氧条件下不同剂量照射后8 h表达比较具有显著性差异(P<0.05,P<0.01);在5%-10%氧浓度条件下,EGFP表达与常氧条件下基本一致.结论 HRE具有增强A549细胞中Egr-1启动子诱导表达的特性,对肿瘤基因-放射治疗具有参考意义.

关键词：辐射、早期生长反应基因1、乏氧反应元件、增强型绿色荧光蛋白

所属期刊栏目：14

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2011-01-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1924-1927