重组人uPA17-KPI在毕赤酵母中的表达及鉴定

摘要：

目的 研究重组人尿激酶型纤溶酶原激活剂(urokinase-type plasminogen activator,uPA)- Kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制剂(Kunitz protease inhibitor,KPI)融合蛋白在毕赤酵母中分泌表达的条件.方法 利用已构建的KPI-pPICZαC毕赤酵母表达载体,人工合成uPA17,利用基因重组技术构建uPA17-KPI-pPICZαC表达载体.电转化毕赤酵母菌X-33,PCR法筛选阳性克隆,分别用SDS-PAGE、胰蛋白酶抑制实验分析鉴定发酵产物.结果 酶切鉴定和DNA测序证实,成功构建uPA17-KPI-pPICZαC表达载体.SDS-PAGE分析在相对分子质量约8 800处出现目的条带,摇瓶水平诱导表达120 h表达量达到高峰,含量可达50 mg/L.表达产物具有胰蛋白酶抑制活性.结论 本研究在毕赤酵母中成功表达uPA17-KPI融合蛋白.

关键词：尿激酶型纤溶酶原激活剂、Kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制剂、毕赤酵母

所属期刊栏目：14

分类号：Q7(分子生物学)

资助基金：国家高技术发展计划863 计划项目资助课题2004AA205020

在线出版日期：2010-12-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1685-1688