人心肌肌钙蛋白I的原核表达与纯化

摘要：

目的 构建人心肌肌钙蛋白I(human cardiac troponin I,hcTnI)原核表达载体并表达、分离纯化重组蛋白.方法 RT-PCR从人心肌组织中克隆出hcTnI的cDNA序列构建到原核表达载体pQE30,获得重组表达质粒pQE30-hcTnI,并在大肠杆菌M15中诱导表达.镍凝胶亲和层析纯化目的蛋白,Western Blot杂交鉴定重组蛋白.结果 经测序证实,获得的目的基因与(GeneBank M64247) 公布的hcTnI基因序列一致.pQE30-hcTnI在大肠杆菌M15中经IPTG诱导后表达出相对分子量约为29 kD的目的蛋白,镍柱纯化后经抗 hcTnI单克隆抗体进行Western印记,在相对分子量约29 kD处可见特异性着色带.结论 体外成功诱导了重组hcTnI蛋白表达,通过镍凝胶亲和层析法获得纯度较高的hcTnI蛋白,为进一步获得hcTnI的抗体及建立相应的临床快速检测方法奠定了实验基础.

关键词：人心肌肌钙蛋白I、原核表达、镍凝胶亲和层析

所属期刊栏目：14

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：吉林省科技厅重点项目合同20060417-1;吉林省科技厅重点项目合同20080435-1;长春市科技局计划项目合同长科技合2008254号,08YJ37

在线出版日期：2010-05-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：358-361