荧光实时定量PCR检测线粒体DNA氧化损伤方法初探

摘要：

目的 体外构建DNA氧化损伤模型,荧光实时定量PCR检测线粒体DNA氧化损伤.方法 体外应用亚甲蓝联合可见光(MBL)方法建立DNA氧化损伤模型,通过8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶(OGG1)特异性切割氧化损伤位点8-羟基鸟嘌呤(8-oxoG),运用荧光实时定量PCR法检测不同比例混匀的OGG1酶切与未酶切的DNA氧化损伤模板.结果 成功构建体外氧化损伤DNA模型,OGG1酶能特异切割氧化损伤位点;OGG1酶切DNA在定量PCR体系模板中所占比例,与线粒体DNA编码基因COⅡ扩增Ct值呈正相关.结论 自制OGG1酶具有良好的生物活性,可以联合荧光实时定量PCR检测DNA氧化损伤.

关键词：线粒体DNA、氧化损伤、荧光实时定量PCR

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分类号：R392.1

资助基金：国家科技部"十一五"重大专项2008ZX10001-007;国家自然科学基金30870853

在线出版日期：2010-05-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：320-324