人B型钠尿肽原核表达载体的构建、表达及蛋白纯化

摘要：

目的 构建人B型钠尿肽(Human B-type Natriurtic Peptide,BNP)原核表达载体并诱导其表达、纯化及鉴定.方法 根据已报道的人BNP 基因序列,采用RT-PCR技术从人心肌组织中获得B型钠尿肽cDNA 序列.将所得的PCR产物插入克隆载体pGEM-T-easy中,得重组质粒,经酶切、PCR 及测序鉴定正确后,将酶切目的 片段插入原核表达载体pGEX-6P-1中并转化大肠杆菌E.coli BL21,通过IPTG诱导表达出带有GST-BNP的融合蛋白.经Glutathione Sepharose(R) 4B亲和层析纯化融合蛋白.结果 序列分析表明,人B型钠尿肽基因活性肽编码区含有96 bp,编码32个氨基酸,与GenBank (NM002521) 中已报道的BNP 核苷酸序列一致.经IPTG诱导表达、SDS-PAGE 电泳和免疫印迹分析显示,表达的融合蛋白占菌体蛋白总量的30%,相对分子质量约为29 KD,并与商品化的人BNP单抗呈特异性反应.经Glutathione Sepharose(R) 4B纯化获得SDS-PAGE电泳下单一条带.结论 获得了人GST-BNP蛋白,为制备BNP检测试剂奠定了基础.

关键词：B型钠尿肽、融合蛋白、表达纯化

所属期刊栏目：14

分类号：R696.3(泌尿科学（泌尿生殖系疾病）)

在线出版日期：2010-04-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：165-167