人乳头瘤病毒18型E6蛋白真核表达载体的构建及其在子宫颈癌细胞株Hela细胞中的表达

摘要：

目的 构建并鉴定p3×flag-myc-CMV- 24-HPV18E6真核表达载体,并转染Hela细胞后,检测其在Hela细胞中的表达.方法 用RT-PCR法从Hela细胞中扩增出带HindⅢ、SalⅠ酶切位点的HPV18E6基因片段,将HPV18E6基因片段连接到pMD-18T载体上,通过限制性内切酶HindⅢ、SalⅠ酶切,T4连接酶连接到含有上述酶切位点的p3×flag-myc-CMV- 24真核表达载体上,通过脂质体将p3×flag-myc-CMV-24- HPV18E6转染入Hela细胞48 h后,Western-blot检测HPV18E6及3×flag表达情况.结果 p3×flag- myc-CMV-24-HPV18E6真核表达载体构建成功,构建的真核表达载体可以被限制性内切酶HindⅢ、SalⅠ切开,电泳可显示相应条带,经测序其序列与设计的一致,转染到Hela细胞48 h后经Western-blot检测可见HPV18E6的高表达及flag的表达.结论 p3×flag-myc-CMV-24 HPV18E6真核表达载体的成功构建为进一步研究HPV18E6的致癌机制奠定了基础.

关键词：Hela细胞、真核表达载体、HPV18E6、flag

所属期刊栏目：14

分类号：R730.231(肿瘤学)

资助基金：安徽省自然科学基金项目090413117

在线出版日期：2010-04-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：159-161