HE4融合蛋白基因的构建、表达及鉴定

摘要：

目的 重组及表达人附睾上皮分泌蛋白4(HE4)的融合蛋白,为建立一种新的卵巢癌的诊断方法奠定基础.方法 提取人卵巢癌细胞株SKOV3中总RNA,应用RT-PCR技术扩增出HE4基因,将其与PUCm-T载体连接,转化入TOP10菌中进行克隆并测序鉴定.进一步构建PET28a-HE4表达体系,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,最终在BL21菌中表达HE4融合蛋白(含有His-Tag),并进行SDS-PAGE及western blot鉴定.结果 SKOV3细胞株提取的RNA经RT-PCR扩增后得到一条400 bp左右的DNA片断,经测序鉴定含HE4基因序列;成功构建了HE4融合蛋白的重组表达质粒;并在大肠杆菌中实现了可溶性高表达,经western blot鉴定为HE4融合蛋白.结论 采用原核表达方法可获得高纯度的HE4融合蛋白,为进一步开发HE4诊断试剂打下基础,为卵巢癌的诊断开辟新途径.

关键词：卵巢癌、HE4基因、克隆、表达

所属期刊栏目：14

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2010-04-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：17-19