高效表达型T克隆载体的构建及其特性

摘要：

目的 研制高效表达型T载体用于基因的表达及蛋白功能分析.方法 限制性内切酶EcoR V酶切真核表达载体pcDNA3,回收线性化质粒片段与三磷酸胸腺嘧啶脱氧核苷酸(dTTP)70℃退火,构成T克隆载体并回收纯化.将增强绿色荧光蛋白基因(EGFP)和中国旱獭α干扰素基因(cwIFNA5)分别扩增后直接克隆到新构建的表达型T载体,转化感受态细菌,挑选阳性菌并制备质粒瞬时转染真核细胞,荧光显微镜观察EGFP的表达,病毒保护试验检测中国旱獭α干扰素的生物学活性.结果 成功构建了表达型T载体,外源基因EGFP和cwIFNA5克隆进该载体后可以进行高效表达,基因转染72 h后,荧光显微镜观察到EGFP基因转染细胞荧光阳性率在80%以上,荧光强度高;病毒保护试验表明cwIFNA5基因转染细胞培养上清干扰素效价达1∶640.结论 新构建的表达型T载体可用于基因的克隆之外,还可以直接用于基因的高效表达及蛋白质功能分析.

关键词：表达型T载体、基因克隆、基因表达

所属期刊栏目：13

分类号：Q785(基因工程（遗传工程）)

资助基金：教育部高等院校博士点基金20070487152;湖北省自然科学基金2008CDB188

在线出版日期：2009-12-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：1137-1139