自身抗原gp210融合蛋白的重组表达及其临床应用研究

摘要：

目的 重组表达人核包膜蛋白自身抗原gp210融合蛋白,以用于原发性胆汁性肝硬化(PBC)的临床诊断和病情监测.方法 针对基因库中人gp210的cDNA序列设计引物,从正常人的淋巴细胞中提取RNA,通过反转录PCR方法扩增得到相应的基因片段,经测定序列验证后插入表达载体PET28a(+),构建重组表达载体PET28a(+)-gp:210,转化大肠杆菌BL21(DE3)后诱导表达蛋白质,并经SDS-PAGE、Western-blot鉴定重组表达的gp210融合蛋自,进一步经Ni2+亲合层析柱纯化.应用重组gp210融合蛋白建立间接ELISA,检测PBC患者血清中的抗gp210抗体.结果 经核苷酸序列测定和酶切鉴定结果表明,成功地构建了PET28a(+)-gp210重组质粒.经SDS-PAGE、Westem-blot鉴定,获得了具有免疫原性的重组gp210融合蛋白.经ELISA检测,PBC患者中抗gp210抗体的阳性率为40.5%,与疾病对照组及正常对照组比较有显著性差异(P＜0.05).PBC患者临床资料分析表明,抗gp210阳性患者中IgM浓度显著高于抗gp210阴性患者;经UDCA治疗后,28位PBC患者中,3例抗gp210抗体由阳性转为阴性,9例抗gp210抗体持续阳性,1例抗gp210抗体由阴性转为阳性,16例抗gp210抗体持续阴性;其他临床症状与抗gp210抗体无显著相关.结论 应用重组gp210融合蛋白建立ELISA检测自身抗体,对PBC诊断具有较好的特异性,为PBC的临床诊断和病情监测提供了有力依据.

关键词：PBC、自身抗原、gp210、重组融合蛋白

所属期刊栏目：11

分类号：R392.11

资助基金：国家自然科学基金30471616;上海市科技攻关项目04DZ19116;上海市科研项目051409012;上海市青年科技启明星计划QMX01423

在线出版日期：2007-07-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：739-742