pSiRNA-Shh逆转录病毒载体的构建及对恶性脑胶质瘤细胞作用的离体实验研究

摘要：

目的 建立逆转录病毒介导的人Shh基因RNA干扰体外表达体系并观察对恶性脑胶质瘤细胞的作用.方法 将人Shh基因RNA干扰双链转录DNA片段重组到逆转录病毒质粒Psilencer 5.1-H1 Retro中,构建成携带人Shh基因RNA干扰逆转录病毒载体pSiRNA-Shh,经PT67细胞包装后,产生的重组逆转录病毒感染恶性脑胶质瘤细胞株U251和CHG-5细胞,用WST-8、RT-PCR和Western Blotting分别检测对转染细胞活性、人Shh mRNA和蛋白表达的影响.结果 重组pSiRNA-Shh质粒经测序鉴定正确.重组逆转录病毒滴度可达210×104 CFU/ml,感染U251和CHG-5恶性脑胶质瘤细胞株后3 d能明显抑制细胞生长,RT-PCR和Western Blotting检测人Shh mRNA和蛋白表达水平明显低于阴性对照组和未干扰组.结论 携带人Shh基因RNA干扰双链转录DNA片段的逆转录病毒体现出明显的抑制恶性脑胶质瘤细胞生长作用,为下一步开展基因治疗恶性脑胶质瘤奠定了基础.

关键词：pSiRNA-Shh逆转录病毒载体、恶性脑胶质瘤、基因治疗

所属期刊栏目：11

分类号：R739.41(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金30500527;重庆市自然科学基金CSTC;2006BB5092

在线出版日期：2007-07-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：598-602