PCR反应体系中Mg2+浓度对从石蜡包埋组织中提取DNA进行PCR反应的影响

摘要：

目的探讨PCR反应体系中Mg2+浓度对从石蜡包埋组织中提取DNA进行PCR反应的影响.方法从石蜡包埋组织中提取DNA,PCR反应扩增甲状腺髓样癌RET基因第13外显子,分析PCR反应体系中Mg2+浓度分别为1.5 mmol/L、2.0 mmol/L、2.5 mmol/L、3.0 mmol/L、4.0 mmol/L时PCR反应产物中目的基因含量及对PCR产物基因序列测定的影响.结果5种条件扩增的目的基因经纯化后DNA含量分别为4.8ng/μl(1.5 mmol/L)、26.6 ng/μl(2.0 mmol/L)、40.2 ng/μl(2.5 mmol/L)、38.5 ng/μl(3.0 mmol/L)、44.5 ng/μl(4.0 mmol/L);Mg2+浓度为4.0 mmol/L时PCR产物电泳图见到多条非特异性条带;Mg2+浓度为2.5mmol/L时PCR产物直接测序反应曲线峰图背景噪音(噪峰)减小,信噪比(信号/噪音)增高.结论从石蜡包埋组织中提取DNA行PCR反应,Mg2+浓度为2.5 mmol/L时反应特异性强,PCR产物质量高.较高的Mg2+浓度可以增加PCR反应产量,但降低反应的特异性.

关键词：Mg2+、石蜡包埋组织、DNA提取、多聚酶链反应、DNA序列测定

所属期刊栏目：8

分类号：Q781(基因工程（遗传工程）)

资助基金：吉林省卫生厅科研项目2002046;中-日合作项目1993

在线出版日期：2004-09-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：384-386