dUTP/UDG反应体系在荧光定量PCR中抗污染能力评价

摘要：

目的探讨dUTP/UDG反应体系在荧光定量PCR中抗PCR产物污染的能力.方法用TaqMan荧光定量PCR检测方法进行定量检测.将一系列不同浓度的含dUTP的HBV-DNA PCR扩增产物作为污染源,分别加至含dUTP/UDG的PCR反应体系和普通荧光定量PCR反应体系中,在荧光定量PCR仪上进行定量检测,从而得出含dUTP/UDG的PCR反应体系的抗污染能力.结果 1.最佳抗污染实验条件:UDG酶含量0.05 U,消化时间37℃5 min,灭活时间92℃1 min;dUTP100%代替dTTP,四种底物浓度相等.2.含0.05 U的UDG抗污染反应体系对每管浓度为103拷贝/ml的污染物可完全消化,并随UDG含量的增高及消化时间的延长,抗污染能力增强.结论 dUTP/UDG反应体系的应用能有效防止PCR产物污染,但抗污染能力是有一定限度的,尚需加强实验室标准化管理,才能真正达到抗污染效果.

关键词：尿嘧啶DNA糖基化酶、脱氧尿嘧啶、荧光定量PCR

所属期刊栏目：7

分类号：R373.2(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：94-97