金黄色葡萄球菌腺苷酰转移酶耐药基因的克隆及其原核表达

摘要：

目的：在大肠杆菌中克隆、表达金黄色葡萄球菌氨基糖苷类耐药基因：腺苷酰转移酶基因,为其功能研究奠定基础。方法按金黄色葡萄球菌腺苷酰转移酶蛋白编码序列设计引物,以金黄色葡萄球菌基因组DNA为模板,扩增腺苷酰转移酶基因。将所得片段与pGEX-4t-1(+)载体连接,转化到感受态大肠杆菌BL21(DE3),提取质粒进行双酶切及测序鉴定, IPTG诱导重组蛋白表达, SDS-PAGE及Western-blot对重组蛋白进行鉴定。结果使用金黄色葡萄球菌基因组为模板,成功扩增约800 bp目的片段,重组质粒双酶切见目的片段,测序显示腺苷酰转移酶基因长783 bp,启始于ATG,终止于TAG,预测的等电点及分子量分别为7.75、28975.44,目的基因与Genbank金葡腺苷酰转移酶同源性为99%, SDS-PAGE及Western-blot显示在55 kD左右见重组蛋白表达。结论在大肠杆菌中成功克隆、表达了金黄色葡萄球菌腺苷酰转移酶基因,为其功能研究提供了物质基础。

关键词：金黄色葡萄球菌、腺苷酰转移酶、耐药基因、克隆、表达

分类号：R91;R38

资助基金：广州市医药科技重点项目项目编号201102A212013；广州市医药科技项目项目编号20131A011053

在线出版日期：2015-05-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：281-282,283