角膜基质细胞Toll样受体4对茄病镰刀菌炎性反应的实验研究

摘要：

目的 检测茄病镰刀菌刺激小鼠角膜基质细胞后Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)的表达分布状况,探讨TLR4与炎性因子分泌的关系.方法 对小鼠角膜基质细胞进行原代培养和鉴定；制备茄病镰刀菌液；MTT法观察菌液刺激对角膜基质细胞生长作用的影响；免疫组化、RT-PCR测定刺激后不同时间点角膜基质细胞TLR4的表达；ELISA检测封闭TLR4对菌液诱导的角膜基质细胞分泌TNF-α、IL-8的影响.结果 采用消化法1～2 d培养出小鼠角膜基质细胞,抗波形蛋白免疫荧光染色阳性；菌液刺激48h后,MTT法显示刺激组较对照组OD值明显下降；正常角膜基质细胞TLR4在蛋白及mRNA水平呈弱表达,刺激6h可达到高峰,12h开始逐渐降低；菌液可上调角膜基质细胞TNF-α、IL-8的释放,刺激3h、6h、12 h的TNF-α、IL-8的浓度与TLR4 mRNA的表达呈明显的正相关(P＜0.05);预先封闭TLR4,可明显降低TNF-αt、IL-8的释放.各时间组间的差异有统计学意义(P＜0.05).结论 角膜可能通过TLR4识别真菌感染,TLR4在角膜对真菌的免疫炎性防御反应中起到重要作用.

关键词：角膜基质细胞、茄病镰刀菌、Toll样受体4、真菌性角膜炎、炎性反应

所属期刊栏目：29

分类号：R7

资助基金：福建医科大学教授发展基金项目JS06033

在线出版日期：2012-01-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1197-1202