应用流式-荧光原位杂交协助鉴别诊断EB病毒感染的淋巴细胞亚群

摘要：

目的:建立流式细胞术-荧光原位杂交联用技术(Flow-FISH),探讨Flow-FISH技术在临床EB病毒(Ep-stein-Barr virus)感染性疾病 中感染细胞亚型鉴定的临床前诊断价值.方法:通过Ficoll-paque离心分离法收集重庆医科大学附属儿童医院招募的9例EBV感染患者的外周血标本中单个核细胞;通过qRT-PCR检测细胞EBER1及EBER2表达;通过荧光标记抗体对细胞表面标志物进行检测,经固定破膜剂对标记后细胞进行固定及破膜处理后与FISH探针37℃条件下过夜杂交,通过流式细胞仪、荧光显微镜检测细胞状态、表面抗原染色以及FISH探针与靶mRNA的结合.结果:优化固定破膜剂配方,建立0.2％Tween-20 4℃破膜15 min为破膜条件,此条件对细胞状态及表面抗原影响小,不干扰流式细胞术对细胞亚群判定.优化杂交液配方,探明20％甲酰胺和7％硫酸葡聚糖在37℃过夜条件下杂交为最优杂交条件,此条件下细胞形态及流式分群好,探针杂交效果佳.通过使用Flow-FISH技术能特异性区分各EBV+以及EBV-淋巴细胞系.通过Flow-FISH技术,成功鉴定临床外周血标本中的EBV+淋巴细胞亚群.结论:初步建立流式细胞术-荧光原位杂交联用检测EBV感染细胞亚群技术,为其进一步的临床前实验奠定基础.

关键词：流式-荧光原位杂交、爱泼斯坦-巴尔病毒、鉴别诊断、EB病毒编码的小RNA

所属期刊栏目：30

分类号：R446.6(诊断学)

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;国家自然科学基金

在线出版日期：2022-07-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

页码：897-907