羊驼噬菌体展示纳米抗体库中Lea模拟抗原表位筛选与鉴定的初步研究

摘要：

目的:建立一种新型Lewis血型抗原的合成方法,即利用羊驼噬菌体展示纳米抗体库筛选Lewis血型抗原的模拟表位,并将模拟表位序列进行生物合成.方法:用单克隆抗Lewis a(Lea)抗体亲和淘选羊驼噬菌体展示纳米抗体文库来选择Lea抗原的模拟表位.利用酶联免疫吸附试验(ELISA)对阳性克隆菌与筛选原Lea单克隆抗体的亲和力进行检测,选择高亲和力的阳性克隆菌进行测序,并对最终确定的序列进行表达合成.最后通过ELISA法对合成后的Lea模拟抗原进行灵敏度、特异度以及临床样本的验证.结果:随机挑取96个噬菌体克隆,有24个阳性克隆,并选取亲和力最强的前14个噬菌体克隆进行测序,结果显示有5个不同序列,选取出现频率最高、差异最大、亲和力最高的3条序列进行表达合成.利用ELISA法检测筛选得到的Lea 模拟抗原的灵敏度及特异性,发现微柱凝胶法与ELISA法的最低检出限相差25倍,且Lea模拟抗原与其他5种单抗(anti-A,anti-B,anti-P1,anti-M,anti-N)没有交叉反应(P＜0.001).最后,检测了 30例临床血浆样本(15例Lea+,15例Lea-),结果显示,15例阳性血浆样本的吸光度的均值高于阴性血浆样本,且具有统计学差异(P=0.02),但临床样本的阳性信号值远低于单抗的阳性信号值.结论:初步建立了利用羊驼噬菌体纳米抗体库筛选Lea模拟抗原的方法,有望实现Lea模拟抗原表位的筛选,从而实现ELISA、化学发光等高灵敏度检测方法在血型抗体鉴定方面的应用.

关键词：模拟表位、羊驼噬菌体纳米抗体库、Lea抗原

所属期刊栏目：30

分类号：R457.11(治疗学)

资助基金：中国人民解放军总医院创新计划项目NO.CX19006

在线出版日期：2022-07-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：877-883