血小板miRNA的表达谱分析

摘要：

目的:研究在体外常规储存1、3和5d血小板微小RNA(miRNA)的表达谱,探讨miRNA在血小板储存期的变化.方法:留取来自无偿献血捐献者单采血小板20份,摇匀后等量混合,贮存于(22±2)℃恒温血小板振荡保存箱中.分别在d1、3和5取样(分别命名为C_1、C_3和C_5),应用DNA纳米球(DNB)测序技术对血小板miRNA组进行测序,采用每千百万碱基的转录本(TPM)算法标准化miRNA的表达水平,组间miRNA表达差异＞2倍(P＜0.001)认为表达差异具有统计学意义.采用实时荧光定量PCR方法验证miRNA的表达.结果:通过DNB测序,分别获得C_1、C_3和C5组688、730和679个表达的血小板miRNA,聚类分析表明其表达谱发生明显变化.在C_1、C_3和C5组中前20个高表达miRNA的表达量约占各组miRNA总表达量的4/5,各组前5位的miRNA均为miR-21-5p、miR-26a-5p、miR-199a-3p、miR-126-3p和let-7f-5p.C_1、C_3和C5组血小板高表达的55个miRNA(＞1000 TPM)组间表达模式高度相似,其差异无统计学意义(P＞0.05).通过对高表达miRNA(＞1000 TPM)在各组中的差异表达分析发现,与C_1组相比,C_3组共有6个miRNA显著差异表达,其中表达上调的是miR-146a-5p、miR-379-5p和miR-486-5p,表达下调的是miR-652-3p、miR-142-5p和miR-7-5p;C_5组共有4个miRNA显著差异表达,表达上调的是miR-146a-5p和let-7b-5p,表达下调的是miR-30d-5p和miR-142-5p.对表达量为1-1000 TPM之间miRNA差异表达分析发现,与C_1组相比,C_3组有133个显著差异表达的miRNA,其中表达上调是99个,表达下调是34个;C_5组中有77个显著差异表达的miRNA,其中表达上调是31个,表达下调是46个.检测的6个差异表达miRNA的荧光定量PCR结果与测序结果基本一致.结论:通过对储存1、3和5d血小板miRNA组进行测序,发现随着血小板体外储存时间的延长,miRNA表达谱发生明显改变.

关键词：血小板;微小RNA表达谱;测序;表达分析;荧光定量PCR

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分类号：R457.1;R331.143(治疗学)

资助基金：山东省自然科学基金面上项目;山东省医药卫生科技发展计划项目;山东省医药卫生科技发展计划项目;中国输血协会威高科研基金资助项目;山东省血液中心项目

在线出版日期：2022-03-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：256-263