10.19746/j.cnki.issn1009-2137.2020.04.004
MiR-199a-5p通过靶向DRAM1调控急性髓系白血病对阿柔比星的敏感性
目的:比较miR-199a-5p在急性髓系白血病(AML)耐药细胞株K562/ADM以及敏感细胞株K562中的表达,研究其对AML耐药的调控效应并探索其机制.方法:采用MTT法检测阿柔比星(ADM)对K562/ADM和K562细胞的生长抑制率并计算IC5o.采用实时荧光定量RT-PCR的方法检测2种细胞株(K562/ADM和K562)以及患者骨髓标本(复发难治AML患者和化疗后完全缓解AML患者)中miR-199a-5p的表达.通过细胞转染的方法在K562/ADM细胞中转入miR-199a-5p mimic使其表达上调,在K562细胞中转入miR-199a-5pinhibitor使其表达下调,采用CCK-8法检测ADM对2种细胞的增殖抑制率,实时荧光定量PCR和Western blot法分别检测转染后2种细胞中DRAM1基因和蛋白的表达.双荧光素酶报告基因实验检测miR-199a-5p与DRAM13'UTR是否存在直接结合位点.采用siRNA的方法下调K562/ADM细胞中DRAM1表达,CCK-8法检测ADM对细胞增殖抑制率的变化.结果:ADM对K562/ADM和K562细胞的IC50分别为146.14±0.079和3.08±0.056 μg/ml.miR-199a-5p在复发难治AML患者骨髓中的表达明显低于完全缓解患者,在K562/ADM细胞中的表达明显低于K562细胞(P<0.05).当K562/ADM细胞中miR-199a-5p表达上调时,ADM对细胞的增殖抑制率升高,DRAM1基因和蛋白表达明显下降.当K562细胞中miR-199a-5p表达下调时,ADM对细胞的增殖抑制率明显下降,DRAM1基因和蛋白表达明显升高(P<0.05).双荧光素酶报告基因实验显示,miR-199a-5p与DRAM1的3'UTR区存在直接结合位点.K562/ADM细胞中DRAM1在基因和蛋白水平表达均明显高于K562细胞(P<0.05).当K562/ADM细胞中DRAM1基因表达下调后,细胞对ADM的敏感性显著升高(P<0.05).结论:miR-199a-5p在耐药白血病细胞中呈低表达.miR-199a-5p表达能够调控AML细胞对ADM的敏感性.DRAM1是miR-199a-5p调控AML耐药的功能性靶基因.
miR-199a-5p、DRAM1、化疗耐药、急性髓系白血病
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R733;R457.1(肿瘤学)
2020-09-15(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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