K562细胞中DNMT1与SHP-1启动子2甲基化关系的研究

摘要：

目的:探讨慢性髓系白血病(CML)急变细胞系K562细胞中DNA甲基转移酶1(DNMT1)与造血细胞磷酸酶(SHP-1)基因表达及其启动子2的甲基化状态的关系.方法:分析NCBI数据库中SHP-1基因启动子2启动子区序列.将携带DNMT1 shRNA的psiHIV-mU6-shDNMT1和樱桃色荧光蛋白(mcherryFP) psiHIV-mU6-control 的慢病毒干扰载体感染K562细胞系.应用甲基化特异的聚合酶链反应(MSP)和亚硫酸氢盐修饰后测序法(BSP)检测K562细胞中SHP-1基因启动子2的甲基化状态,Western blot检测SHP-1、DNMT1蛋白的表达水平,SYBRGreen荧光定量PCR检测SHP-1 mRNA的表达.结果:SHP-1基因启动子2在-353 bp-+182 bp区有22个CpG岛,K562细胞中SHP-1基因启动子2异常高甲基化且SHP-1蛋白表达缺失.K562细胞转染psiHIV-mU6-shDN-MT1后DNMT1表达水平为0.48±0.06,较转染psiHIV-mU6-control组明显降低(1.33±0.19) (t=4.18,P=0.014).K562细胞中SHP-1蛋白表达缺失,转染psiHIV-mU6-shDNMT1后K562细胞SHP-1蛋白恢复表达,转染psiHIV-mU6-shDNMT1的K562细胞中SHP-1 mRNA相对表达水平(14.23±3.83)较转染psiHIV-mU6-control组(1.031±0.156)高(P=0.004).DNMT1基因沉默后SHP-1基因启动子2中CpG岛去甲基化.结论:K562细胞中DNMT1与SHP-1启动子2的异常甲基化及沉默相关.

关键词：SHP-1、DNMT1、K562细胞、启动子甲基化

所属期刊栏目：26

分类号：R733.72(肿瘤学)

资助基金：河北省医学研究课题ZD2014090

在线出版日期：2018-06-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：401-406