OCT4A基因对K562细胞生物学活性的影响

摘要：

目的:探讨OCT4A基因体外对K562细胞生物学行为的影响及与凋亡相关的分子机制.方法:克隆人OCT4A基因,构建靶向上调及下调OCT4A基因与绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的重组慢病毒表达载体pLVX-OCT4A-ZsGreen1、PLB-OCT4A shRNA,三质粒包装系统包装病毒,并测定滴度.实验分为空白对照、pLVX空质粒、pLVX-OCT4A-ZsGreen1、PLB-OCT4A shRNA和非特异shRNA共5组.Western-blot检测各组OCT4A蛋白表达.CCK-8法绘制各组细胞增殖曲线.采用AnnexinV/7-AAD标记流式细胞术检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞分化抗原CD11b和CD15表达;实时定量PCR检测caspase3、BIM、BCL-xL和BAX mRNA表达变化.结果:成功克隆人OCT4A基因,并成功构建重组慢病毒载体pLVX-OCT4A-ZsGreen1和PLB-OCT4A shRNA.Western blot 证实2种病毒感染后可分别有效上调及下调OCT4A蛋白的表达.CCK-8法检测显示,pLVX-OCT4A-ZsGreen1组K562细胞体外增殖活性明显升高,而pLVX-OCT4A shRNA组K562细胞增殖活性显著降低(P＜0.05).感染后pLVX-OCT4A-ZsGreen1和PLB-OCT4A shRNA 2组K562细胞凋亡率分别为(3.48±0.52)％和(7.25±0.57)％(P＜0.05),而OCT4A过表达及抑制后细胞表面分化抗原CD15、CD11b的表达无明显变化.OCT4A上调后Caspase-3、BIM、BAX较对照组均下调,但差异无统计学意义(P＞0.05),而BCL-xL基因表达则明显升高(P＜0.01).结论:成功构建重组慢病毒载体pLVX-OCT4A-ZsGreen1及PLB-OCT4A shRNA,它们可分别有效地上调及下调OCT4A蛋白表达.OCT4A基因可促进K562细胞的增殖、抑制凋亡,其抑制凋亡机制可能与BCL-xL基因上调有关.

关键词：OCT4A基因、K562细胞、白血病、细胞凋亡

所属期刊栏目：26

分类号：R733.72(肿瘤学)

资助基金：青年人才项目;江苏省"六大人才高峰"高层次人才项目;江苏省连云港市卫生计生科技项目

在线出版日期：2018-06-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：330-335