Bruton酪氨酸激酶泛素化调节的研究

摘要：

目的:探讨Bruton酪氨酸激酶(Bruton's Tyrosine Kinase,Btk)的代谢调节途径和可能的分子机制.方法:用蛋白酶体抑制剂和/或佛波酯(PMA)处理内源性表达Btk的B细胞系A20、Ramos细胞及转染了外源性Btk的293T、COS-7细胞,应用RT-PCR法检测上述细胞Btk mRNA表达水平,Western blot法检测Btk蛋白表达水平;通过抗IgM抗体交联BCR刺激A20细胞,检测细胞Btk泛素化水平;用Btk、泛素和Cbl共转染COS-7细胞,检测其泛素化Btk水平;用Btk和编码野生型或突变型泛素(K29R、K48R、K63R)即单泛素的质粒共转染293T细胞,经蛋白酶体抑制剂处理后用抗泛素抗体和抗Btk抗体检测泛素化Btk水平;稳定转染并表达Btk-GFP的293T细胞经氯喹处理后,应用Western blot检测其Btk蛋白表达水平.结果:蛋白酶体特异性抑制剂和/或佛波酯可减少Btk转录,从而引起Btk蛋白表达下降.Btk通过泛素化进行翻译后修饰,泛素化修饰程度与Btk的表达及活化水平有关.Cbl为Btk的E3泛素连接酶,它可导致Btk泛素化.Btk受多聚和/或单泛素化调节,Btk可在溶酶体内发生泛素化和降解,溶酶体抑制剂氯喹可上调Btk的表达.结论:Btk蛋白的表达水平受泛素化途径调节,该调节与Btk的表达水平有关.

关键词：Bruton酪氨酸激酶、泛素化、蛋白酶体抑制剂、B细胞

所属期刊栏目：25

分类号：Q55;R733.72;R733.1(酶)

资助基金：国家自然科学基金;江苏省自然科学基金;南京医科大学科技发展基金面上项目

在线出版日期：2017-11-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1559-1565