CRISPR/Cas9基因编辑技术建立S1PR5基因敲除小鼠

摘要：

目的:利用CRISPR/Cas9基因编辑技术建立S1PR5基因敲除的小鼠模型,为研究鞘氨醇-1-磷酸受体5(sphingosine-1-phosphate receptor 5,S1PR5)在异基因造血干细胞移植中的作用提供实验工具.方法:根据S1PR5基因第三外显子碱基序列,设计针对S1PR5基因的sgRNA(single guide RNA),构建sgRNA表达质粒,利用T7 RNA聚合酶体外转录sgRNA和Cas9后,将Cas9 mRNA和sgRNA对C57BL/6小鼠的受精卵进行显微注射.使用T7E1酶切和或基因测序检测S1PR5基因碱基的突变情况,然后应用qPCR和Western blot方法检检测S1PR5是否被成功敲除.结果:获得了2种S1PR5基因突变的F2代纯合子小鼠,即基因分别缺失170 bp和215 bp的S1PR5-170/-170小鼠和S1PR5-215/-215小鼠.在这两种小鼠中,S1PR5在mRNA和蛋白水平均没有表达.结论:成功建立了S1PR5基因敲除的小鼠模型,为探讨S1PR5在异基因造血干细胞移植的作用提供了研究平台.

关键词：CRISPR/Cas9、S1PR5基因敲除、异基因造血干细胞移植

所属期刊栏目：24

分类号：R457.7(治疗学)

资助基金：国家自然科学基金81270642

在线出版日期：2016-10-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：1155-1162