SIRT1启动子表达调控载体的构建和活性分析及AML1-ETO对其转录活性的影响

摘要：

目的:本研究旨在分析AML1-ETO阳性白血病中SIRT1基因的表达及调控机理,寻找SIRT1核心启动子区域.方法:利用实时定量PCR方法在AML1-ETO阳性白血病细胞株和白血病临床样本中研究SIRT1基因的表达情况;构建SIRT1基因启动子-荧光素酶报告载体,分析其在293T细胞中的活性.采用PCR方法从含有SIRT1基因转录起始位点5'区的基因片段中扩增SIRT1基因核心启动子序列,插入经Xho Ⅰ和HindⅢ双酶切的荧光素酶报告载体pGL3-Basic,采用阳离子脂质体SuperFect包裹荧光素酶报告重组子转染293T细胞,应用双荧光素酶检测试剂盒测定荧光素酶活性.采用双荧光素酶报告基因检测方法,研究AML1-ETO对SIRT1启动子转录活性的调节作用.结果:AML1-ETO的表达与SIRT1的表达呈正相关;成功构建了6种SIRT1基因序列的荧光素酶报告重组子,并通过了酶切以及基因测序方法的鉴定;荧光素酶报告重组子在293T细胞中的荧光素酶活性明显高于阴性对照,明确了SIRT1基因核心启动子位置;研究结果证明融合蛋白AML1-ETO可以正向调控SIRT1启动子活性,SIRT1对AML1-ETO阳性白血病发生发展的影响.研究表明:SIRT1可能是AML1-ETO的靶基因之一.结论:成功构建了SIRT1基因启动子-荧光素酶报告载体,找到了SIRT1基因核心启动子区,且核心启动子在293T细胞中有较高的活性.AML1-ETO通过促进SIRT1启动子的活性对其进行转录调控.

关键词：SIRT1基因、荧光素酶报告基因、基因表达调控、基因转染、转录调控、AML1-ETO阳性白血病

所属期刊栏目：23

分类号：R733.7(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目30800482,81270610,81170518,30971297;北京市科技新星计划项目2011114;北京市自然科学基金7132217;军队高新技术项目2010gxjs091

在线出版日期：2015-04-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：12-18