白血病细胞中共表达P2X7受体和Notch1胞内区

摘要：

本研究旨在构建野生型及N187D突变型P2X7与ICN1基因的共表达载体,并在白血病细胞中表达,为进一步探讨P2X7在白血病发展中的作用奠定基础.采用Overlap PCR法,通过2A连接,构建野生型或N187DP2X7与ICN1的共表达载体；经DNA序列分析验证后,包装病毒、感染K562细胞并经细胞分选获得稳定感染细胞系.采用RT-PCR、Western blot、胞浆游离钙离子浓度测定等方法,验证外源基因的表达及P2X7受体的功能.结果表明,序列分析显示载体构建正确；包装病毒对K562细胞感染效率40％-70％,流式分选获得稳定表达细胞株；RTPCR结果显示,P2X7受体和/或ICN1基因可在对应的稳定表达细胞株中高效表达；Western blot也证明,P2X7受体可在感染编码P2X7受体基因病毒的K562细胞中高效表达；胞浆游离钙离子浓度检测显示,在BzATP刺激下,表达野生及N187D突变型P2X7的K562细胞胞浆游离钙离子浓度持续升高.结论:本研究在白血病细胞中成功共同高表达P2X7受体与ICN1,为进一步探讨野生型和N187D突变型P2X7受体在白血病发展中的作用奠定基础.

关键词：白血病细胞、P2X7受体、Notch1、胞内区

所属期刊栏目：21

分类号：R733.7(肿瘤学)

资助基金：基金资助:国家自然科学基金编号81170511,30971111;国家973项目编号2009CB918901,2009CB521803;天津市自然科学基金编号11JCZDJC18200教育部新世纪优秀人才支持计划编号NCET-08-0329

在线出版日期：2013-08-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：544-549