携带TRAIL基因慢病毒载体的构建及其体外感染淋巴瘤细胞效率
本研究目的构建携带人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)基因的慢病毒载体,并研究其对不同细胞系的淋巴瘤细胞的感染效率.采用分子克隆技术,将针对TRAIL基因mRNA的cDNA片段插入到克隆栽体pGM-T,构建pGM-T-TRAIL,然后将测序正确的TRAIL基因克隆至慢病毒表达载体pWPI,构建慢病毒表达载体pWPI-TRAIL.最后利用pWPI/VSV-G/△8.2慢病毒包装系统,通过转染293T细胞,制备重组慢病毒plenti-TRAIL,并进行浓缩和滴度测定.将重组慢病毒栽体感染不同来源的淋巴瘤细胞系,测定荧光表达评价感染效率,利用RT-PCR和Western blot法评价TRAIL基因的表达情况.结果表明,酶切鉴定及测序结果表明pGM -T-TRAIL和pWPI-TRAIL载体构建成功,滴度测定结果显示浓缩的重组慢病毒plenti-TRAIL浓度可达109 IU/ml.感染效率结果显示YTS细胞较DOHH2和Jurkat细胞更易被慢病毒感染(P＜0.05).RT-PCR和Western blot实验表明淋巴瘤细胞后plenti-TRAIL感染后可有效地表达TRAIL基因.结论:成功构建了慢病毒表达载体pWPI-TRAIL,并制备出重组慢病毒plenti-TRAIL.plenti-TRAIL可以有效感染不同细胞来源的淋巴瘤细胞系,同时感染后的淋巴瘤细胞可以有效表达TRAIL基因.
人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体、慢病毒载体、淋巴瘤
20
R733.1;R733.4(肿瘤学)
2013-05-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共6页
900-905
